MRS琼脂是一种专门用于分离和培养乳酸菌的选择性培养基，广泛应用于微生物学实验、食品工业和生物工程研究中，尤其是在发酵食品和益生菌的研究中。它提供了乳酸菌所需的营养成分，能够支持其生长，同时抑制其他微生物的生长。因此，正确使用并掌握一些实验技巧，对于获得准确的实验结果至关重要。
一、使用注意事项
1、pH的调整：
MRS琼脂具有吸湿性，因此在长期存储过程中，pH可能会发生变化，导致培养基酸度增高，从而影响某些乳酸菌的生长。因此，使用前应确认培养基的pH值，如果需要，使用NaOH或HCl进行适当的调整。
2、无菌操作：作为一种选择性培养基，需要严格的无菌操作。在配制和倒入培养皿时，应确保所有器具经过高温灭菌，以防杂菌污染。此外，接种过程中，尤其是从含有其他微生物的样品中分离乳酸菌时，需要严格控制接种环境，防止外源性微生物的污染。
3、选择性培养：虽然对乳酸菌提供了丰富的营养，但仍然可能滋生一些非乳酸菌，特别是在处理复杂样品时。在这种情况下，可以考虑添加一些抗生素来进一步提高培养基的选择性，以抑制其他细菌的生长，增强对乳酸菌的选择性。
4、培养条件：适用于厌氧或微需氧环境下的乳酸菌生长。因此，在培养乳酸菌时，应提供适宜的气体环境。可以将培养皿放入厌氧袋或使用厌氧罐进行培养，确保培养期间低氧环境的稳定。如果无法提供厌氧条件，可以使用微需氧条件培养，但可能会影响某些乳酸菌的生长。
二、实验技巧
1、接种技巧：使用无菌接种环或接种棒进行接种时，必须确保操作时的无菌条件。取样时，尽量避免空气中微生物的污染。对于复杂样品，如土壤、水样或发酵食品，可以先进行适当的稀释，逐步接种到MRS琼脂平板上，避免菌落重叠或过密。为了更好的分离菌落，常采用划线法进行接种。
2、观察与鉴定：乳酸菌在琼脂上的菌落通常较小，呈圆形或不规则形状，且色泽通常为乳白色或淡黄色。通过观察菌落形态、大小、质地等特征可以进行初步筛选。在进一步的实验中，可以通过生化反应、形态学观察以及分子生物学方法来确认乳酸菌的种类。
3、选择性培养技巧：如果实验目的是筛选特定的乳酸菌种，可以使用一些选择性方法来进一步提高选择性。例如，可以使用特定的抗生素，或者通过调节培养基的pH值，使其更适应某一类乳酸菌的生长，同时抑制其他微生物的繁殖。
4、避免过度培养：由于乳酸菌是发酵型细菌，在培养过程中会产生大量乳酸，导致培养基酸度升高。在某些情况下，这可能会抑制乳酸菌的生长，因此需要避免过度培养。一般来说，观察菌落生长情况24小时后应进行菌落计数和后续分析。
MRS琼脂作为一种常用的乳酸菌选择性培养基，广泛应用于微生物学实验中，特别是在乳酸菌的分离和鉴定过程中。使用时应注意培养基的pH值、温度、选择性等方面的调整，并采取合适的实验技巧，如严格的无菌操作、适宜的接种方法等。
